Pengesanan imunofluoresensi langsung

Bukti struktur tisu, antibodi dan patogen melalui pelabelan imun adalah popular, moden dan tepat. Immunofluorescence merujuk kepada pelabelan imun dengan antibodi pendarfluor yang sudah siap yang dibuat untuk bersinar di bawah sinar UV.

Dekat Pengesanan imunofluoresensi langsung substrat diperiksa secara langsung dengan antibodi bercahaya, tanpa antibodi primer atau antigen buatan.

Apakah pengesanan imunofluoresensi langsung?

Antigen spesifik tumor dalam tisu tumor dapat dikesan secara langsung dengan imunofluoresensi. Ini memungkinkan untuk mengetahui dari mana metastasis yang ada berasal dari badan.

Pengesanan imunofluoresensi langsung adalah kaedah diagnostik berdasarkan pengetahuan mengenai imunologi, imunostaining dan imunohistokimia. Fokus di sini adalah keupayaan antibodi untuk mengikat titik-titik tertentu dalam tisu atau antigen dalam serum. Tempat-tempat ini adalah epitop.

Dalam diagnostik biokimia, terdapat antibodi tiruan atau mimetik (tunggal: mimetik) yang membolehkan ikatan antibodi-antigen ini ditandai dengan pendarfluor atau radioaktiviti. Konjugat antibodi buatan mengikat di satu sisi ke epitop dan di sisi lain mempunyai penanda pendarfluor dalam kes imunofluoresensi. Ini adalah alternatif untuk menggunakan penanda radioaktif. Perkara istimewa mengenai pengesanan langsung imunofluoresensi berbanding dengan pengesanan tidak langsung adalah bahawa antibodi yang mengikat epitop antigen dalam bahan yang diperiksa juga mewakili konjugat antibodi dengan penanda pendarfluor. Antibodi tambahan tidak diperlukan untuk pengesanan langsung.

Fluorescein, yang bersinar di bawah sinar UV, dan fluorescein isothiocyanate (FITC) digunakan sebagai pewarna untuk membuat konjugat antibodi buatan dalam imunofluoresensi. Sejauh ini ia agak rumit, tetapi pengesanan imunofluoresensi langsung adalah kaedah diagnostik makmal perubatan standard untuk pelbagai persoalan perubatan. Antibodi dengan pewarna pendarfluor siap dijual.

Fungsi, kesan & matlamat

Pengesanan langsung imunofluoresensi tersedia untuk pemeriksaan tisu untuk mengotorkan struktur tertentu dalam tisu. Tetapi ia juga tersedia untuk sel tunggal. Sitometri aliran memainkan peranan utama di sini. Akhirnya, terdapat imunisasi fasa pepejal dan cecair. Pemeriksaan imunofluoresensi tisu sangat penting dalam onkologi, iaitu rawatan perubatan penyakit barah.

Antigen spesifik tumor dalam tisu tumor dapat dikesan secara langsung dengan imunofluoresensi. Pemeriksaan ini terhadap sampel tisu dari tumor sering kali penting untuk mengetahui dari mana metastasis yang ada berasal dari tubuh, atau untuk membuat penilaian sama ada tumor itu jinak atau ganas. Pemeriksaan sel individu dengan pengesanan imunofluoresensi langsung digunakan untuk mencari antigen virus, antigen bakteria dan epitop lain.

Sebagai contoh, anda dapat mengetahui sama ada sel-sel tersebut dijangkiti virus dan tahap kitaran jangkitan di mana sel berada. Nama FACS (= Penyortiran Sel Diaktifkan-Fluoresensi) adalah kaedah sitometri aliran yang sangat efisien di mana sel-sel yang ditandai dengan pendarfluor diedarkan ke tabung uji yang berbeza bergantung pada jenis warna. Prosedur ini penting dalam imunologi, hematologi dan penyakit berjangkit.

Pemeriksaan imunofluoresensi memungkinkan pengesanan langsung toksin persekitaran, organisma yang diubahsuai secara genetik dan bahan tambahan tertentu dalam makanan. Dalam persediaan eksperimen ini selalu ada fasa pepejal dan cecair. Banyak patogen, termasuk virus HIV yang menyebabkan AIDS, juga dapat dikesan secara langsung. Walau bagaimanapun, semasa mengesan penyakit berjangkit dan autoimun, selalunya masalah mengesan antibodi daripada antigen. Ini adalah molekul pertahanan yang dibentuk oleh sistem ketahanan badan. Menurut definisi yang dikemukakan di sini, bukti seperti itu bukan bukti langsung, kerana antibodi pendarfluor tidak berpasangan langsung dengan antigen tubuh sendiri, tetapi dengan antigen susunan ujian.

Antigen ini dalam susunan eksperimen seterusnya berkaitan dengan antibodi tubuh sendiri. Pengesanan langsung imunofluoresensi untuk jangkitan biasa, misalnya virus HIV dan klamidia, hanya digunakan dalam ujian pengesanan dan pengesahan khas. Terdapat ujian untuk banyak lagi penyakit. Dalam kebanyakan situasi, pengesanan antibodi secara tidak langsung lebih sesuai untuk penyakit berjangkit, kerana sistem kekebalan tubuh sendiri mempunyai kemampuan bijak untuk mengingat jangkitan sebelumnya. Dalam situasi lain, pengesanan antigen secara langsung dan pengesanan antibodi tidak langsung saling melengkapi. Yang terakhir menunjukkan bahawa jangkitan telah berlaku sebelumnya, sementara yang pertama memberikan maklumat yang lebih tepat mengenai status aktiviti patogen semasa.

Anda boleh mendapatkan ubat anda di sini

➔ Ubat untuk menguatkan sistem pertahanan dan ketahanan badan

Risiko, kesan sampingan & bahaya

Dengan pengesanan imunofluoresensi langsung, seperti semua bukti perubatan, terdapat dua risiko: risiko hasil palsu, hasil positif dan risiko hasil negatif, palsu. Keputusan yang salah dan positif menyebabkan ketidakselesaan psikologi dan tekanan yang besar bagi pesakit.

Oleh itu, prosedur ujian tambahan ditambahkan ke hasil positif, terutama jika diagnosis membawa kepada perubahan kehidupan yang drastik. Risiko dari hasil yang salah dan negatif adalah bahawa pesakit tidak mengetahui tentang ancaman terhadap kesihatannya sendiri dan bahkan mungkin untuk kesihatan awam pada waktunya. Oleh itu, ada baiknya melakukan banyak penyelidikan dan membuat dan menawarkan sebilangan besar pengesanan langsung imunofluoresensi berbeza yang siap dijual. Bersama kaedah pengesanan langsung dan tidak langsung yang lain untuk penyakit dan patologi, ini meningkatkan ketepatan diagnosis.

Pengesanan langsung berdasarkan konjugat antibodi, yang di satu pihak mengikat epitop antigen dan di sisi lain juga menyebabkan pendarfluor. Oleh itu, produk sedemikian hanya digunakan dalam satu jenis prosedur ujian dan tidak digunakan untuk jenis prosedur ujian yang lain.Ini adalah perbezaan prosedur penting dengan bukti tidak langsung, di mana antibodi pendarfluor didahului oleh antibodi primer untuk pengikatan epitop. Oleh itu konjugat antibodi sesuai untuk ujian yang berbeza. Perbezaan prosedur ini berbeza dengan perbezaan perubatan antara pengesanan antibodi tidak langsung dan pengesanan antigen secara langsung.